多克隆抗體制備相較于單克隆抗體的生產流程,多克隆抗體無需復雜的雜交瘤技術或細胞培養步驟,實驗操作相對簡單快捷,大大降低了生產成本和時間投入。能同時與抗原上的多個表位結合,提高了檢測系統的靈敏度和準確性。這一特性使其在免疫沉淀、酶聯免疫吸附測定等實驗中表現出色,能夠有效捕獲低濃度的目標分子。
多克隆抗體制備時的注意事項:
1.儲存條件:應保存在低溫環境下(如4℃或-20℃),避免反復凍融導致活性下降。長期不用時建議分裝保存,減少開蓋次數以防污染。
2.封閉與洗滌:在使用多抗進行實驗時,需用5脫脂奶粉或BSA充分封閉非特異性結合位點,并通過加強TBST洗滌來降低背景噪音。這是由于多抗易產生較高的背景信號,影響結果的準確性。
3.工作濃度優化:不同批次或來源的多抗可能存在差異,因此在使用前應進行預實驗,摸索出工作濃度范圍。過高或過低的工作濃度都可能影響實驗結果的可靠性。
4.交叉反應檢查:盡管已經過特異性驗證,但在實際使用中仍需注意潛在的交叉反應問題。特別是在復雜的生物樣品中,可能存在與其他分子相似的結構域導致假陽性結果的情況。因此,建議設置適當的對照實驗以排除這種可能性。
5.避免反復凍融:反復凍融會導致抗體結構的破壞和活性的損失,因此在使用過程中應盡量避免這種情況的發生。如果必須多次使用同一份抗體溶液,可以考慮將其分成小份保存。
6.注意有效期:即使是在理想的儲存條件下,多克隆抗體也有一定的有效期限制。過期后的抗體可能會失去活性或發生降解,因此在使用前應檢查其有效期并遵循生產商的建議。